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本制品是一种多聚核苷酸5'羟基激酶，可以催化ATP的γ位磷酸基团向单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'羟基转移。其它NTP也可产生相同的反应：5'-OH + NTP → 5'-P + NDP。

本制品缺失了3'磷酸酶活性，即不能催化3'端磷酸化多聚核苷酸的去磷酸化：3'-P → 3'-OH + Pi (最适pH为5.9左右)。特别适用于把OH-DNA/RNA-p催化转变为p-DNA/RNA-p，或把Np催化转变为pNp。

• 寡核苷酸、DNA或RNA的5'末端标记；
  
• 寡核苷酸、DNA或RNA的5'端磷酸化，确保后续连接反应顺利进行；
  
• 催化3'磷酸化的单核苷酸的5'磷酸化，产生的底物pNp可以和DNA或RNA的3'末端连接；
  
• 催化3'磷酸化的寡核苷酸的5'末端标记。

• 75℃加热10min或65℃加热20分钟可使T4 PNK(3'phosphatase minus)失活，加入EDTA也可使T4 PNK(3'phosphatase minus)失活。
  
• 金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50mM的KCl和NaCl均可显著抑制T4 PNK(3'phosphatase minus)的活性。

• 铵盐沉淀获得的DNA不能用于T4 PNK(3' phosphatase minus)的标记反应。铵盐可强烈抑制T4 PNK(3'phosphatase minus)的酶活性。
  
• 酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。

• T4 PNK(3'phosphatase minus)催化单链DNA 5'端磷酸化的效果请参考图1。
  
  图1.本制品催化单链DNA 5'端磷酸化的效果图。使用本制品或本公司的T4 Polynucleotide Kinase，在50μL反应体系中加入图中指定量的本制品或百奥莱博的T4 Polynucleotide Kinase，37℃孵育30分钟进行反应，65℃孵育20分钟以终止反应。取出20μL反应液，用增强型ATP检测试剂盒检测反应体系中剩余ATP的浓度，根据反应体系中剩余ATP的浓度计算出反应体系中剩余ATP的量，根据反应体系中剩余ATP的量和初始加入的总量计算出反应体系中消耗掉的ATP量，消耗掉的ATP量可以反映T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)和T4 Polynucleotide Kinase的激酶活性。以反应体系中加入的酶量为横坐标，消耗掉的ATP量为纵坐标作图。如图所示，本制品与T4 Polynucleotide Kinase (货号：YT513/YTB4169)相比，具有类似的催化单链DNA 5'端磷酸化效果。反应体系(50μL):70mM Tris-HCl (pH7.6 at 25℃),10mM MgCl₂,5mM DTT,2μM ATP,2μM ssDNA，以及加入1μL不同浓度的T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)和T4 Polynucleotide Kinase。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
  
• T4 PNK(3'phosphatase minus)催化3'端磷酸化DNA去磷酸化的效果请参考图2。
  
  图2.本制品催化3'端磷酸化DNA去磷酸化的效果图。使用本制品或百奥莱博的T4 Polynucleotide Kinase，在20μL反应体系中加入图中指定量的本制品或百奥莱博的T4 Polynucleotide Kinase，37℃孵育30分钟进行反应，65℃孵育20分钟以终止反应。取出10μL反应液，用磷酸根荧光检测试剂盒检测反应体系中的荧光信号，根据荧光信号的强弱可知磷酸根的多少，荧光信号越显著，则磷酸根越多，磷酸根越多，则说明T4 Polynucleotide Kinase (3'phosphatase minus)和T4 Polynucleotide Kinase具有显著的磷酸酶活性；反之则没有磷酸酶活性。以反应体系中加入的酶量为横坐标，检测到的荧光值为纵坐标作图。如图所示，本制品不具有催化3'端磷酸化DNA去磷酸化的活性，而T4 Polynucleotide Kinase具有催化3'端磷酸化DNA去磷酸化的活性。反应体系(20μL):70mM Tris-HCl (pH7.6 at 25℃),10mM MgCl₂,5mM DTT,15μM ssDNA (3'端磷酸化)，以及加入1μL不同浓度的T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus)和T4 Polynucleotide Kinase。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

• DNA 5'末端标记：
  
  • 参考如下表格设置反应体系：
    

    成分	用量
    底物DNA	1～20pmol
    10×T4 PNK Buffer	2μL
    [γ-32P or γ-33P]-ATP(3000Ci/mmol)	20pmol
    Nuclease-free Water	至19μL
    T4 PNK(3'phosphatase minus,10U/μL)	1μL

    
    
  • 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
    
  • 37℃孵育30min。
    
  • 加入1μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
    
  • 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。产物DNA纯化试剂盒可以向百奥莱博订购。
• DNA 5'末端磷酸化：
  
  • 参考如下表格设置反应体系：
    

    成分	用量
    底物DNA	1～20pmol
    10×T4 PNK Buffer	2μL
    0.1mM ATP	1μL
    Nuclease-free Water	至19μL
    T4 PNK(3'phosphatase minus,10U/μL)	1μL

    
    
  • 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
    
  • 37℃孵育30min。
    
  • 加入1μL 0.5M EDTA (pH8.0)混匀，以终止反应。
    
  • 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。产物DNA纯化试剂盒可以向百奥莱博订购。
• 其它用途可以参考上述用途或相关文献资料进行。